Набор для ПЦР в реальном времени на вирус оспы обезьян
Информация о продукте
Использование по назначению
Он используется для обнаружения вируса оспы обезьян в образцах сыворотки человека или экссудата поражений с использованием систем ПЦР в реальном времени.
Принцип тестирования
Этот продукт представляет собой систему анализа ПЦР в реальном времени Taqman® на основе флуоресцентного зонда.Для обнаружения гена F3L вируса оспы обезьян разработаны специальные праймеры и зонды.Внутренний контроль, нацеленный на консервативный ген человека, контролирует сбор образцов, обработку образцов и процесс ПЦР в реальном времени, чтобы избежать ложноотрицательных результатов.Набор представляет собой полностью лиофилизированную премиксную систему, которая включает материалы, необходимые для обнаружения вируса оспы обезьян: фермент амплификации нуклеиновых кислот, фермент UDG, реакционный буфер, специфический праймер и зонд.
Основное содержание
Поставляемые компоненты перечислены в таблице.
| Компоненты | Упаковка | Ингредиент |
| Вирус оспы обезьянЛиофилизированный премикс | 8 стрипов ПЦР-пробирок× 6 пакетов | Праймеры, зонды, смесь dNTP/dUTP, Mg2+, ДНК-полимераза Taq, фермент UDG |
| Положительный контроль MPV | 400 мкл×1 пробирка | Последовательности ДНК, содержащие целевой ген |
| MPV отрицательный контроль | 400 мкл×1 пробирка | Последовательности ДНК, содержащие сегмент гена человека |
| Растворяющий раствор | 1 мл×1 пробирка | Стабилизатор |
| Сертификат соответствия | 1 кусок | / |
Ход операции
1. ОбразецКоллекция:Образцы следует собирать в стерильные пробирки в соответствии с
со стандартными техническими характеристиками.
2. Подготовка реагентов (зона подготовки реагентов)
Выньте компоненты комплекта, сбалансируйте их при комнатной температуре для использования в режиме ожидания.
3. Обработка образцов (зона обработки образцов)
3.1 Экстракция нуклеиновой кислоты
Рекомендуется брать 200 мкл жидких образцов, положительный контроль и отрицательный контроль для экстракции нуклеиновых кислот в соответствии с соответствующими требованиями и процедурами наборов для экстракции вирусной ДНК.
3.2 Растворение лиофилизированного порошка и добавление темплата
Приготовьте лиофилизированный премикс с вирусом оспы обезьян в соответствии с количеством образцов.Для одного образца требуется одна пробирка для ПЦР, содержащая лиофилизированный порошок премикса.Отрицательный контроль и положительный контроль следует рассматривать как два образца.
(1) Добавьте 15 мкл растворяющего раствора в каждую пробирку для ПЦР, содержащую лиофилизированный премикс, затем добавьте 5 мкл экстрагированных образцов/отрицательного контроля/положительного контроля в каждую пробирку для ПЦР соответственно.
(2) Плотно закройте пробирки для ПЦР, встряхните пробирки для ПЦР вручную до полного растворения и смешивания лиофилизированного порошка, соберите жидкость на дно пробирок для ПЦР с помощью мгновенного центрифугирования на низкой скорости.
(3) Если для обнаружения используется обычный прибор для ПЦР в реальном времени, то непосредственно перенесите пробирки для ПЦР в зону амплификации;Если для обнаружения используется БТК-8, то необходимо выполнить следующие операции: перенести 10 мкл жидкости из ПЦР-пробирки в лунку реакционного чипа БТК-8.Одна пробирка ПЦР соответствует одной лунке чипа.Во время пипетирования убедитесь, что пипетка расположена под углом 90 градусов по вертикали.Наконечники пипетки с аэрозольным барьером следует размещать в центре лунки с умеренной силой и прекратить толкать пипетку, когда она достигнет первой передачи (во избежание образования пузырьков).После заполнения лунок выньте мембрану реакционного чипа, чтобы закрыть все лунки, а затем чип переносят в зону обнаружения амплификации.
4. ПЦР-амплификация (зона обнаружения)
4.1 Поместите пробирки для ПЦР/реакционный чип в реакционный резервуар и установите названия каждой реакционной лунки в соответствующем порядке.
4.2. Настройки детекции флуоресценции: (1) вирус оспы обезьян (FAM);(2) Внутренний контроль (CY5).
4.3. Запустите следующий протокол езды на велосипеде.
Протокол ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Шаги | Температура | Время | Циклы | |
| 1 | Предварительная денатурация | 95℃ | 2 минуты | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 10 с | 45 |
| Отжиг, удлинение, приобретение флуоресценции | 60℃ | 30 с | ||
Протокол БТК-8:
| Шаги | Температура | Время | Циклы | |
| 1 | Предварительная денатурация | 95℃ | 2 минуты | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 5 с | 45 |
| Отжиг, удлинение, приобретение флуоресценции | 60℃ | 14 с | ||
5. Анализ результатов (см. руководство пользователя прибора)
После реакции результаты будут сохранены автоматически.Нажмите «Анализ» для анализа, и прибор автоматически интерпретирует значения Ct каждого образца в столбце результатов.Отрицательные и положительные результаты контроля должны соответствовать следующим пунктам «6. Контроль качества».
6. Контроль качества
6.1 Отрицательный контроль: Ct отсутствует или Ct>40 в канале FAM, Ct<40 в канале CY5 с нормальной кривой амплификации.
6.2 Положительный контроль: Ct<35 в канале FAM с нормальной кривой амплификации, Ct<40 в канале CY5 с нормальной кривой амплификации.
6.3 Результат действителен, если соблюдены все вышеперечисленные критерии.В противном случае результат недействителен.
Интерпретация результата
Возможны следующие результаты:
| Значение Ct канала FAM | Значение Ct канала CY5 | Интерпретация | |
| 1# | Нет Ct или Ct>40 | ≤40 | Вирус оспы обезьян отрицательный |
| 2# | ≤40 | Любые результаты | Положительный результат на вирус оспы обезьян |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Повторный тест;если оно все еще 40~45, сообщите как 1# |
| 4# | Нет Ct или Ct>40 | Нет Ct или Ct>40 | Неверный |
ПРИМЕЧАНИЕ: Если получен неверный результат, образец необходимо собрать и протестировать еще раз.
запросить информацию
| наименование товара | Кот.Нет | Размер | Образец | Срок годности | Пер.и Сто.Темп. |
| Набор для ПЦР в реальном времени на вирус оспы обезьян | Б001П-01 | 48 тестов/набор | Сыворотка/экссудат поражения | 12 месяцев | -25～-15℃ |
